GPD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403706-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPD1 Double Nickase Plasmid (h) e il GPD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPD1 Antibody (E-7): sc-376219
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403706-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPD1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403706-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GPD1** codifica la **glicerolo-3-fosfato deidrogenasi citosolica 1**, un enzima dipendente da **NADH** che interconverte **diidrossiacetone fosfato** e **glicerolo-3-fosfato**, collegando la glicolisi alla sintesi dei glicerolipidi e all’omeostasi redox. Contribuendo alla navetta del glicerolo fosfato, GPD1 influenza l’equilibrio cellulare **NADH/NAD+**, il trasferimento mitocondriale di elettroni e il flusso del metabolismo lipidico in condizioni nutrizionali variabili. Alterazioni dell’attività di GPD1 sono state associate a fenotipi metabolici che coinvolgono la gestione dei trigliceridi, vie sensibili all’insulina e l’accumulo di lipidi epatici, rendendolo rilevante per studi sulla biologia del tessuto adiposo e del fegato. In quanto nodo di connessione tra utilizzo dei carboidrati e deposito dei lipidi, GPD1 viene frequentemente esaminato in modelli di stress metabolico, bilanciamento ossidativo e rimodellamento energetico.
GPD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.