GP78 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402346-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GP78O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GP78 (h) e o Plasmídeo Double Nickase GP78 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AMFR. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GP78 Anticorpo (3D9): sc-293371
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GP78 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402346-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GP78 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402346-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O AMFR humano codifica a GP78, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING residente no retículo endoplasmático (RE), central para a degradação associada ao RE (ERAD) e para o controle da proteostase pelo sistema ubiquitina–proteassoma. A GP78 coopera com enzimas E2 e componentes de ERAD para ubiquitinar substratos mal dobrados ou regulados, influenciando a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas, a homeostase de lipídios e colesterol e a adaptação celular mais ampla ao estresse. Por meio desses processos, AMFR/GP78 tem sido estudado em contextos de estresse crônico do RE, alterações no turnover proteico e vias ligadas à sinalização oncogênica e a fenótipos associados à metástase em sistemas modelo. Seu papel no controle de qualidade mediado por ubiquitina também se cruza com a dinâmica mitocondrial e a comunicação com vias relacionadas à autofagia, tornando-o relevante para dissecar redes responsivas ao estresse.
GP78 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AMFR em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AMFR. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AMFR. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AMFR interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.