Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Double Nickaseプラスミド (m): sc-436949-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Glutathione Peroxidase 4/GPX4ダブルニカースプラスミド（m）およびGlutathione Peroxidase 4/GPX4ダブルニカースプラスミド（m2）は、Gpx4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Glutathione Peroxidase 4/GPX4 抗体 (E-12): sc-166570
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-436949-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスのGpx4は、グルタチオンを用いて細胞膜内のリン脂質ヒドロペルオキシドを還元し、膜の完全性と酸化還元恒常性を維持するセレン酵素であるグルタチオンペルオキシダーゼ4（GPX4）をコードする。GPX4は、鉄依存性の脂質過酸化を抑制することでフェロトーシスの中核的な抑制因子として機能し、グルタチオン代謝やNRF2により制御される酸化ストレス応答などの抗酸化ネットワークとも連関する。GPX4機能の攪乱はミトコンドリアおよび脂質シグナル伝達を変化させ、炎症性ストレス応答に影響し、酸化・代謝ストレス下での細胞生存性に影響を及ぼす。GPX4活性の異常は、脂質過酸化とフェロトーシス感受性の制御を介して、神経変性、虚血再灌流障害、腫瘍生物学の実験モデルにおいて関与が示唆されている。
Glutathione Peroxidase 4/GPX4 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Gpx4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Gpx4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Gpx4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Gpx4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。