Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420664

Übersicht

Glutathionperoxidase 3 (Gpx3/GPX3) ist ein sezerniertes Selenoenzym, das Wasserstoffperoxid und organische Hydroperoxide unter Verwendung von Glutathion reduziert. Dadurch trägt es zur extrazellulären Redoxhomöostase bei und begrenzt oxidative Schäden an Proteinen und Lipiden. In Mausgeweben und im Plasma hilft GPX3, reaktive Sauerstoffspezies zu puffern, und ist funktionell mit dem Glutathionstoffwechsel, antioxidativen Abwehrnetzwerken sowie entzündungsassoziierter Signalübertragung verknüpft. Veränderte GPX3-Aktivität wurde in der Literatur mit Phänotypen oxidativen Stresses und einer dysregulierten Gewebeumbauung in Verbindung gebracht, mit nachgeschalteten Effekten auf die Endothelfunktion, die Aktivierung von Immunzellen und redoxsensitive Transkriptionsprogramme. Da der extrazelluläre Peroxid-Tonus Signalwege wie MAPK und NF-κB beeinflusst, wird die Perturbation von Gpx3 häufig eingesetzt, um redoxregulierte Signalübertragung und Modelle oxidativer Schädigung zu untersuchen.

Das Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gpx3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gpx3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gpx3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Glutathione Peroxidase 3/GPX3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gpx3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Glutathione Peroxidase 3/GPX3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gpx3-Exone abzielen, die für die Glutathione Peroxidase 3/GPX3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gpx3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gpx3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Glutathione Peroxidase 3/GPX3 HDR-Plasmid (m) und Glutathione Peroxidase 3/GPX3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gpx3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gpx3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.