Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420664

概要

グルタチオンペルオキシダーゼ3（Gpx3/GPX3）は分泌型のセレン酵素で、グルタチオンを用いて過酸化水素および有機ヒドロペルオキシドを還元し、細胞外のレドックス恒常性の維持に寄与するとともに、タンパク質や脂質に対する酸化損傷を抑制します。マウスの組織および血漿において、GPX3は活性酸素種（ROS）を緩衝し、グルタチオン代謝、抗酸化防御ネットワーク、ならびに炎症関連シグナル伝達と機能的に連携します。文献上では、GPX3活性の変化が酸化ストレス表現型や組織リモデリングの異常と関連づけられており、その下流で内皮機能、免疫細胞の活性化、レドックス感受性の転写プログラムに影響を及ぼすことが示されています。細胞外の過酸化物トーンはMAPKやNF-κBなどの経路に影響するため、Gpx3の撹乱はレドックス制御シグナルや酸化障害モデルを解析する目的でしばしば用いられます。

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGpx3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gpx3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gpx3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Glutathione Peroxidase 3/GPX3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Glutathione Peroxidase 3/GPX3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gpx3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Glutathione Peroxidase 3/GPX3の機能に不可欠なGpx3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gpx3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGlutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gpx3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Glutathione Peroxidase 3/GPX3 HDRプラスミド（m）および Glutathione Peroxidase 3/GPX3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGpx3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGpx3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。