Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402413-ACT

Human GPX3 kodiert die Glutathionperoxidase 3, ein sezerniertes Selenoprotein, das Wasserstoffperoxid und Lipidhydroperoxide unter Verwendung von Glutathion reduziert und dadurch extrazelluläre oxidative Schäden begrenzt. GPX3 trägt zur Redoxhomöostase, zur Modulation inflammatorischer Signalwege und zum Schutz von Membran- und Matrixbestandteilen vor reaktiven Sauerstoffspezies bei und ist damit in Netzwerke der oxidativen Stressantwort sowie in den Glutathionstoffwechsel eingebunden. Eine veränderte GPX3-Expression wurde in Zusammenhängen berichtet, die mit einer gestörten Redoxbalance assoziiert sind, darunter Krebsbiologie, metabolischer Stress sowie vaskuläre oder Gewebe-Remodelling-Prozesse, bei denen die extrazelluläre antioxidative Kapazität Signalgebung und Interaktionen zwischen Zellen und ihrer Mikroumgebung beeinflussen kann. Diese Eigenschaften machen GPX3 zu einem geeigneten Ziel für die Untersuchung redoxregulierter Signalwege, oxidativer Stress-Phänotypen und der Funktion sezernierter Antioxidantien in humanen Zellmodellen.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GPX3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GPX3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GPX3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Glutathione Peroxidase 3/GPX3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GPX3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Glutathione Peroxidase 3/GPX3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Glutathione Peroxidase 3/GPX3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GPX3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.