Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402413-ACT

ヒトGPX3は、分泌型セレノタンパク質であるグルタチオンペルオキシダーゼ3（glutathione peroxidase 3）をコードしており、グルタチオンを用いて過酸化水素および脂質ヒドロペルオキシドを還元することで、細胞外の酸化的損傷を抑制します。GPX3はレドックス恒常性の維持、炎症シグナル伝達の調節、ならびに活性酸素種（ROS）から膜成分や細胞外マトリックス成分を保護することに寄与し、酸化ストレス応答ネットワークやグルタチオン代謝とも交差します。GPX3の発現変化は、がん生物学、代謝ストレス、血管または組織のリモデリング過程など、レドックスバランスの破綻と関連する状況で報告されており、細胞外の抗酸化能がシグナル伝達や細胞—微小環境相互作用に影響し得ることが示唆されています。これらの特性により、GPX3はヒト細胞モデルにおいて、レドックス制御経路、酸化ストレス表現型、分泌型抗酸化機能を研究するための有用な標的となります。

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPX3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPX3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPX3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Glutathione Peroxidase 3/GPX3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPX3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGlutathione Peroxidase 3/GPX3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPX3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGlutathione Peroxidase 3/GPX3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。