Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GLUD1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402187-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GLUD1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GLUD1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GLUD1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GLUD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GLUD1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GLUD1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLUD1 kodiert die mitochondriale Glutamatdehydrogenase 1, ein Enzym, das die reversible oxidative Desaminierung von Glutamat zu α‑Ketoglutarat und Ammoniak katalysiert und damit den Aminosäureabbau mit dem Tricarbonsäurezyklus (TCA‑Zyklus) und der zellulären Bioenergetik verknüpft. Durch die Regulation des Glutamat/α‑Ketoglutarat‑Knotens beeinflusst GLUD1 den Stickstoffhaushalt, das Redoxgleichgewicht und den anaplerotischen Zufluss, der den oxidativen Stoffwechsel unterstützt. Seine Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die die Insulinsekretion und die Homöostase von Neurotransmittern steuern, indem der Glutamatstoffwechsel an die ATP‑Produktion und die mitochondriale Funktion gekoppelt wird. Eine Fehlregulation von GLUD1 wurde mit Störungen des Aminosäurestoffwechsels und neuroendokrinen Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung der metabolischen Kontrolle in menschlichen Zellen macht.
GLUD1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GLUD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GLUD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GLUD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GLUD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.