Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GLUD1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402187-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GLUD1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GLUD1ダブルニカースプラスミド（h）およびGLUD1ダブルニカースプラスミド（h2）は、GLUD1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GLUD1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GLUD1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLUD1はミトコンドリアのグルタミン酸デヒドロゲナーゼ1をコードしており、この酵素はグルタミン酸をα-ケトグルタル酸とアンモニアへ可逆的に酸化的脱アミノ化する反応を触媒します。これにより、アミノ酸分解代謝がトリカルボン酸（TCA）回路および細胞のエネルギー代謝と結び付けられます。グルタミン酸／α-ケトグルタル酸の結節点を制御することで、GLUD1は窒素代謝、酸化還元バランス、ならびに酸化的代謝を支える補充反応（アナプレロティック）フラックスに影響します。さらに、その活性は、グルタミン酸代謝をATP産生とミトコンドリア機能に結び付けることを介して、インスリン分泌や神経伝達物質の恒常性を制御する経路とも交差します。GLUD1の機能異常はアミノ酸代謝異常や神経内分泌系の表現型を伴う疾患と関連して報告されており、ヒト細胞における代謝制御を研究する上で重要な標的となります。
GLUD1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GLUD1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GLUD1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GLUD1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GLUD1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。