GLP-1R Plasmide Double Nickase (h): sc-400847-NIC

GLP1R codifica il recettore del peptide-1 simile al glucagone (GLP-1R), un recettore accoppiato a proteine G di classe B che media la segnalazione incretinica nelle isole pancreatiche e in numerosi tessuti extra-pancreatici. In seguito al legame con il ligando, GLP-1R attiva principalmente le vie cAMP/PKA ed EPAC dipendenti da Gs, con un ulteriore accoppiamento alla mobilizzazione del calcio e alla segnalazione MAPK/ERK, che possono modulare secrezione, eccitabilità e programmi di espressione genica. Il trafficking del recettore, la desensibilizzazione e i processi dipendenti da β-arrestina regolano ulteriormente la durata della segnalazione e la sua organizzazione spaziale. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di GLP1R sono ampiamente studiate nel contesto della disregolazione metabolica, inclusi diabete e obesità, e sono inoltre oggetto di indagine per possibili ruoli nella fisiologia neuroendocrina e gastrointestinale.

GLP-1R Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GLP1R nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GLP1R. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GLP1R. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GLP1R interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.