GLG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422869

Übersicht

Glg1 codiert für GLG1, ein Golgi-assoziiertes Glykoprotein, das an der Proteinsortierung und dem Transport innerhalb des sekretorischen Weges beteiligt ist und so die korrekte Verarbeitung und Lokalisation von Frachtproteinen im gesamten Endomembransystem unterstützt. Durch seine Golgi-Lokalisation und den luminalen Kontext der Glykosylierung trägt GLG1 zum regulierten Transport von Proteinen bei, die Zell-Zell-Interaktionen und die Kommunikation mit der extrazellulären Matrix beeinflussen. Veränderungen der Golgi-Organisation und der Glykoproteinverarbeitung werden häufig mit gestörter Adhäsion, Migration und Stressantworten in Verbindung gebracht, wodurch Glg1 ein nützlicher Ansatzpunkt ist, um zu untersuchen, wie Störungen im sekretorischen Weg zelluläre Phänotypen umformen. In Mausmodellen und primären Zellsystemen kann eine Perturbation von Glg1 genutzt werden, um die Konsequenzen einer Golgi-Dysfunktion auf Signaloutput und Proteostase auf Pathway-Ebene zu untersuchen.

Das GLG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Glg1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Glg1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Glg1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GLG1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Glg1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GLG1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Glg1-Exone abzielen, die für die GLG1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Glg1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GLG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GLG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Glg1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GLG1 HDR-Plasmid (m) und GLG1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Glg1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Glg1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.