GHR Double Nickaseプラスミド (h): sc-401382-NIC

GHR は成長ホルモン受容体をコードしており、下垂体由来の成長ホルモンに結合して出生後の成長、代謝、組織恒常性を調節する、単回膜貫通型のサイトカイン受容体です。リガンドによって受容体が二量体化すると JAK2 が活性化され、下流の STAT5 シグナル伝達が誘導されます。さらに PI3K–AKT 経路や MAPK/ERK 経路とも連動し、増殖、生存、転写プログラムの形成に関与します。GHR シグナルは肝臓での IGF-1 産生や、より広範な内分泌フィードバックループにも影響し、栄養状態を同化作用および脂肪分解応答と統合します。GHR 活性の異常や経路間クロストークは、成長障害、インスリン感受性に関わる表現型、ならびに JAK/STAT と MAPK の出力が疾患関連の細胞状態に寄与する腫瘍性シグナル伝達ネットワークなど、さまざまな文脈で研究されています。

GHR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GHR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GHR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GHRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GHRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。