GHR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401382-ACT

O GHR humano codifica o receptor do hormônio do crescimento, um receptor de citocinas transmembrana de passagem única que se liga ao GH para iniciar a dimerização do receptor e a ativação da sinalização dependente de JAK2. As cascatas a jusante incluem a transcrição mediada por STAT5, bem como as vias PI3K–AKT e MAPK/ERK, coordenando programas de crescimento, metabolismo e sobrevivência celular em múltiplos tecidos. A atividade do GHR influencia a regulação do eixo IGF e circuitos mais amplos de feedback endócrino, tornando-o um nó-chave em estudos sobre o controle do crescimento somático e a homeostase metabólica. A desregulação da sinalização do GHR está associada a fenótipos de crescimento e endócrinos e é frequentemente investigada em contextos que relacionam a sinalização GH–IGF à proliferação, diferenciação e características metabólicas sistêmicas.

GHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GHR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GHR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GHR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GHR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GHR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GHR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GHR em células tumorais com expressão de GHR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.