GGT5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405055-ACT

ヒトのGGT5は、γ-グルタミルトランスフェラーゼ5という細胞表面酵素をコードしており、グルタチオンおよび関連抱合体のγ-グルタミル結合を加水分解することで、細胞外におけるグルタチオンのターンオーバーとアミノ酸の回収（サルベージ）を支えます。γ-グルタミル回路における役割を通じて、GGT5はレドックス恒常性、システインの利用可能性、ならびにグルタチオン由来中間体の代謝に寄与し、その結果として酸化ストレスシグナル伝達や細胞の解毒プロセスにも影響を及ぼします。GGT5活性は、炎症性微小環境、脂質および異物（キセノバイオティクス）代謝、組織特異的な酸化バランス調節などの文脈で研究されており、レドックス状態やグルタチオンの取り扱いが乱れる疾患関連経路との関わりからも重要です。これらの特性により、GGT5は、グルタチオン分解がシグナル伝達、代謝適応、細胞ストレス応答にどのように影響するかを解明するうえで有用な結節点（ノード）となります。

GGT5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GGT5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GGT5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GGT5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGGT5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GGT5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGGT5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGGT5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGGT5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGGT5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。