GGPS1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404003

Panoramica

GGPS1 codifica la geranilgeranil pirofosfato sintasi 1, un enzima chiave della via del mevalonato che produce geranilgeranil pirofosfato (GGPP), un precursore lipidico isoprenoide essenziale. Il GGPP sostiene la prenilazione delle proteine, consentendo l’associazione alla membrana e l’attività di segnalazione di piccole GTPasi come i membri delle famiglie RAS, RHO e RAB, influenzando così il traffico vescicolare, la dinamica del citoscheletro e la proliferazione. Regolando il flusso degli isoprenoidi e la capacità di prenilazione, GGPS1 contribuisce al controllo metabolico di processi mitocondriali e associati al reticolo endoplasmatico (RE) e si intreccia con la biosintesi del colesterolo e del dolicolo. La deregolazione dell’asse mevalonato–prenilazione e l’alterata attività di GGPS1 sono state associate a dipendenze della segnalazione oncogenica e ad altri disturbi che coinvolgono il metabolismo lipidico e il traffico proteico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GGPS1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GGPS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GGPS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GGPS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GGPS1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GGPS1 per lo studio della segnalazione di GGPS1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GGPS1 critici per la funzione di GGPS1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GGPS1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GGPS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GGPS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GGPS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GGPS1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GGPS1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GGPS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GGPS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.