GCSH CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-406784-ACT-2

ヒトのGCSHは、グリシン開裂系のHタンパク質をコードしており、ミトコンドリアに局在するリポイル基キャリア型サブユニットとして、グリシン脱炭酸酵素複合体のP・T・L各成分の間で中間体を受け渡すことで、グリシン異化と一炭素単位の転移を支えている。リポイル化依存的な活性を介してGCSHは、ミトコンドリアにおける葉酸依存性の一炭素代謝に寄与し、ヌクレオチド生合成、レドックス恒常性、ならびにセリン—グリシン相互変換との代謝的カップリングに影響を及ぼす。GCSHの遺伝学的破綻やリポイル化の障害はグリシン開裂経路の異常と関連し、非ケトン性高グリシン血症などの先天代謝異常と関連づけられている。GCSHのゲノム編集は、ミトコンドリアのアミノ酸代謝、タンパク質リポイル化、一炭素フラックスの機序解明を可能にし、代謝ストレス応答や変異体機能を検証するための細胞モデル作製を含む研究に資する。

GCSH CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GCSHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GCSH CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における GCSH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGCSH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GCSHの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGCSH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGCSH依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGCSH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGCSH経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。