GCN1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411545

概要

GCN1（GCN1L1をコード）は、統合ストレス応答（ISR）において保存された補因子であり、GCN2–eIF2α軸を介した翻訳のアミノ酸感知制御を支えます。栄養制限やリボソーム関連ストレス下でeIF2αキナーゼの活性化を促進することで、GCN1L1は全体的な翻訳抑制と、ATF4依存性転写などのストレス適応プログラムの選択的誘導に寄与します。この制御により、GCN1L1はプロテオスタシス、酸化ストレスおよびミトコンドリアストレス応答、さらに広範な代謝恒常性と結び付けられます。GCN1L1が機能する翻訳ストレスシグナル伝達や栄養応答経路の異常は、がん生物学、神経変性、炎症状態に関連する表現型と関連付けられており、ヒト細胞モデルでの機構研究を支持します。

GCN1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGCN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GCN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GCN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GCN1L1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GCN1L1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GCN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GCN1L1の機能に不可欠なGCN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GCN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GCN1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGCN1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GCN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GCN1L1 HDRプラスミド（h）および GCN1L1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGCN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGCN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。