GATA-6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400724-NIC

GATA6は亜鉛フィンガー型転写因子GATA-6をコードしており、内胚葉および中胚葉の分化を規定する系譜決定因子として、器官形成、上皮アイデンティティ、平滑筋プログラムに関与する遺伝子ネットワークを制御します。ヒト細胞においてGATA-6は、発生シグナルからの入力を統合して転写回路を調節し、増殖、遊走、細胞運命のコミットメントを司るプログラム（Wnt、BMP、Notch依存的なパターニングに関連する経路を含む）を制御します。GATA6の発現異常やコピー数変化は、先天性の発生異常に加え、消化管・膵臓・肺系譜における文脈依存的な腫瘍促進的または腫瘍抑制的な転写状態と関連づけられています。これらの特性によりGATA-6は、疾患関連モデルにおける分化の転写制御、系譜可塑性、ストレス適応的リモデリングを解明するための有用な結節点となります。

GATA-6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GATA6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GATA6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GATA6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GATA6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。