Plasmide CRISPR/Cas9 KO GATA-1 (h): sc-400396

Présentation

GATA1 code pour GATA‑1, un facteur de transcription à doigt de zinc qui se lie aux motifs WGATAR afin de contrôler l’expression de gènes spécifiques de lignée au cours de l’hématopoïèse. Il est essentiel à la maturation érythroïde et à la différenciation des mégacaryocytes, en coordonnant des programmes qui régissent l’hémoglobinisation, la sortie du cycle cellulaire et la différenciation terminale, grâce à des partenariats avec des cofacteurs tels que FOG1 (ZFPM1) et à la modulation du remodelage de la chromatine. L’activité de GATA‑1 s’intègre aux signalisations érythropoïétine/JAK–STAT et à des réseaux transcriptionnels plus larges pour façonner l’expression des gènes érythroïdes et plaquettaires. La dérégulation ou les mutations de GATA1 sont étroitement liées à des troubles du développement et de la différenciation des cellules sanguines, notamment des cytopénies congénitales et des leucémies myéloïdes caractérisées par des programmes érythroïdes/mégacaryocytaires altérés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GATA-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GATA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GATA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GATA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GATA-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GATA1 pour l'étude de la signalisation de GATA-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GATA1 essentiels à la fonction de GATA-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GATA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GATA-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GATA-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GATA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GATA-1 plasmide HDR (h) et le GATA-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GATA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GATA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.