GAP-43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420484

概要

Gap43は、成長関連タンパク質43（GAP-43）をコードしている。GAP-43はニューロンに豊富に発現する膜結合性のリン酸化タンパク質で、成長円錐やシナプス前終末に局在し、神経突起伸長、軸索誘導、シナプス再構築を制御する。GAP-43の機能はアクチン細胞骨格の動態やカルシウム依存性シグナル伝達と密接に関係しており、膜との相互作用や可塑性関連過程を調節するPKC（プロテインキナーゼC）によるリン酸化などが含まれる。マウスでは、Gap43の発現は発生過程および神経損傷後に増加するため、軸索成長や再生応答の分子マーカーとして広く用いられている。GAP-43依存的な回路再編が破綻すると、神経発達性疾患および神経変性疾患モデルにおけるシナプス結合性の変化と関連することが報告されており、神経ネットワーク機能の機構研究における重要性を支持している。

GAP-43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGap43遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gap43内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gap43のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GAP-43タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GAP-43シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gap43欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GAP-43の機能に不可欠なGap43エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gap43ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GAP-43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGAP-43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gap43遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GAP-43 HDRプラスミド（m）および GAP-43 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGap43ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGap43標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。