GalNAc-T9 Double Nickase Plasmid (h): sc-412077-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GalNAc-T9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GalNAc-T9 Double-Nickase-Plasmid (h) und GalNAc-T9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GALNT9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GalNAc-T9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-412077-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das humane **GALNT9**-Gen kodiert die Polypeptid‑N‑Acetylgalactosaminyltransferase 9 (GalNAc‑T9), ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Initiationsenzym der mukinartigen O‑Glykosylierung, das GalNAc auf Ser/Thr‑Reste sekretierter und membranständiger Proteine überträgt. Durch die Prägung von Initiationsmustern der O‑Glykane beeinflusst GalNAc‑T9 die Proteinreifung, den Transport und die Präsentation von Glykanen an der Zelloberfläche und wirkt sich damit auf Rezeptorsignale sowie Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen aus. Eine veränderte GALNT9‑Expression oder ‑Aktivität wurde mit dem Glycosylierungs‑Remodeling in Verbindung gebracht, das bei onkogener Transformation und Tumorprogression beobachtet wird, was das Gen für Studien zur Epithelbiologie, Adhäsion und metastatischen Phänotypen relevant macht. Das Gen ist zudem von Interesse, um zu klären, wie Glykosylierung die Immunerkennung und extrazelluläre Signale aus der Mikroumgebung reguliert.
GalNAc-T9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GALNT9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GALNT9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GALNT9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GALNT9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.