GALC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401025

Visão geral

GALC codifica a galactocerebrosidase, uma hidrolase lisossomal que cataboliza galactolipídios como a galactosilceramida e a psicossina, sustentando o turnover de esfingolipídios e a homeostase lipídica da mielina. Ao contribuir para a reciclagem lisossomo-dependente de lipídios de membrana, o GALC conecta a função lisossomal a vias mais amplas do metabolismo de esfingolipídios, respostas ao estresse celular e fisiologia neuroglial. A atividade alterada de GALC está associada a um manuseio desregulado da psicossina e a um desequilíbrio de lipídios relacionados à mielina, tornando-o relevante para estudos de mecanismos de leucodistrofia e de processos neurodegenerativos impulsionados por lisossomos. Em células humanas, GALC serve como um nó útil para dissecar como o catabolismo lisossomal de lipídios molda a composição de membranas, o tráfego intracelular e a viabilidade celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GALC (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GALC em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GALC, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GALC na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GALC.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GALC para a investigação da sinalização de GALC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GALC críticos para a função GALC
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GALC para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GALC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GALC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GALC. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GALC Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GALC (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GALC para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GALC definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.