GABP-β1/2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404040-ACT

GABPB1 codifica a subunidade beta-1/2 da proteína de ligação a GA (GABP-β1/2), o parceiro obrigatório da subunidade de ligação ao DNA da família ETS, que em conjunto forma o complexo do fator de transcrição GABP. Esse complexo regula programas de promotores e de enhancers que controlam a biogênese e a respiração mitocondriais, a progressão do ciclo celular e a diferenciação, ao coordenar a expressão de genes mitocondriais codificados no núcleo e de outros alvos associados ao crescimento. A sinalização de GABP intersecciona vias que sustentam a homeostase energética celular, a capacidade proliferativa e a especificação de linhagem, e alterações na atividade de GABP têm sido associadas a redes transcricionais desreguladas no câncer e em outros distúrbios do metabolismo celular. Como o GABP integra a transcrição dependente de ETS a programas mitocondriais e biossintéticos, GABPB1 é frequentemente estudado em contextos como fosforilação oxidativa, adaptação ao estresse e reprogramação oncogênica da transcrição.

GABP-β1/2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GABPB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GABP-β1/2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GABPB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GABPB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GABP-β1/2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GABPB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GABP-β1/2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GABP-β1/2 em células tumorais com expressão de GABPB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.