GABA_B R2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402517-ACT

GABBR2 codifica a subunidade 2 do recetor GABA\(_B\) (GABA\(_B\) R2), um componente essencial dos recetores metabotrópicos GABA\(_B\) funcionais, que formam heterodímeros com o GABBR1 para mediar uma neurotransmissão inibitória lenta no sistema nervoso central. Após a ligação do ligando, estes recetores acoplam-se a proteínas Gi/o para inibir a adenilil ciclase, reduzir a sinalização cAMP/PKA, modular vias de MAPK, abrir canais de potássio GIRK e suprimir a atividade de canais de cálcio dependentes de voltagem, moldando em conjunto a excitabilidade neuronal e a plasticidade sináptica. A sinalização GABA\(_B\) influencia oscilações de rede, libertação de neurotransmissores e o desenvolvimento neuronal, ligando a regulação do recetor a múltiplos processos neurobiológicos. Alterações na expressão ou na função de GABBR2 têm sido associadas a fenótipos neurológicos e neuropsiquiátricos, incluindo suscetibilidade a crises e desregulação do equilíbrio excitatório–inibitório, tornando-o relevante para estudos mecanísticos em modelos de doença.

GABAB R2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GABBR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GABAB R2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GABBR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GABBR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GABAB R2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GABBR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GABAB R2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GABAB R2 em células tumorais com expressão de GABBR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.