Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
GABAB R1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401714-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GABAB R1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GABAB R1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GABAB R1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GABBR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GABAB R1: sc-166408
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GABAB R1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401714-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABAB R1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401714-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABBR1 kodiert die humane GABA\_B-Rezeptoruntereinheit 1 (GABA\_B R1), einen obligaten Bestandteil heterodimerer G‑Protein‑gekoppelter Rezeptoren, die im zentralen Nervensystem eine langsame inhibitorische Neurotransmission vermitteln. Nach Aktivierung koppelt die GABA\_B-Signalübertragung an G\_i/o-Proteine, um die Adenylylcyclase zu hemmen, cAMP/PKA-Signalwege zu modulieren, die Aktivität von Calcium- und Kaliumkanälen zu regulieren und die Neurotransmitterfreisetzung an prä- und postsynaptischen Stellen zu unterdrücken. Dieser Signalweg beeinflusst die neuronale Erregbarkeit, synaptische Plastizität und Netzwerkoszillationen und verknüpft GABBR1 damit mit Mechanismen, die die Funktion neuronaler Schaltkreise formen. Eine veränderte GABAerge inhibitorische Grundaktivität (inhibitorischer Tonus) und eine dysregulierte GABA\_B-Rezeptor-Signalübertragung wurden im Zusammenhang mit neurologischen und neuropsychiatrischen Phänotypen untersucht und stützen den Einsatz von Modellen mit GABBR1-Störung für mechanistische Studien.
GABAB R1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GABBR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GABBR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GABBR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GABBR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.