CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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GABAB R1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401714-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GABAB R1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GABAB R1ダブルニカースプラスミド（h）およびGABAB R1ダブルニカースプラスミド（h2）は、GABBR1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GABAB R1 抗体 (D-2): sc-166408
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GABAB R1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401714-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABAB R1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401714-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABBR1は、ヒトのGABA_B受容体サブユニット1（GABA_B R1）をコードしており、中枢神経系における遅い抑制性神経伝達を担うヘテロ二量体型Gタンパク質共役受容体の必須構成要素である。活性化されると、GABA_Bシグナル伝達はG_i/oタンパク質と共役してアデニリルシクラーゼを阻害し、cAMP/PKA経路を調節するとともに、カルシウムおよびカリウムチャネル活性を制御し、シナプス前・後部位での神経伝達物質放出を抑制する。この経路は神経細胞の興奮性、シナプス可塑性、ネットワークオシレーションに影響し、回路機能を形作る機構とGABBR1を結び付けている。GABA作動性抑制トーンの変化やGABA_B受容体シグナル伝達の破綻は、神経学的・神経精神医学的表現型との関連で研究されており、機序解明研究におけるGABBR1改変モデルの有用性を支持している。
GABAB R1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GABBR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GABBR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GABBR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GABBR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。