GABAA Rβ2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405041-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GABAA Rβ2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GABAA Rβ2 Double-Nickase-Plasmid (h) und GABAA Rβ2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GABRB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GABAA Rβ2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405041-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABAA Rβ2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405041-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABRB2 kodiert die menschliche β2‑Untereinheit des γ‑Aminobuttersäure‑Rezeptors Typ A (GABA\(_A\)Rβ2), einen zentralen Bestandteil ligandengesteuerter Chloridkanäle, die die schnelle inhibitorische Neurotransmission im Zentralnervensystem vermitteln. Durch die Assemblierung mit weiteren GABA\(_A\)‑Rezeptoruntereinheiten beeinflusst GABA\(_A\)Rβ2 den Rezeptortransport, die synaptische Clusterbildung und die Gate‑Eigenschaften des Kanals, die die neuronale Erregbarkeit und Netzwerkoszillationen prägen. Die Funktion von GABRB2 ist in die Organisation inhibitorischer Synapsen, postsynaptische Signalübertragung und aktivitätsabhängige Plastizität eingebettet und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die das Gleichgewicht zwischen Erregung und Hemmung steuern. Genetische oder funktionelle Störungen von GABRB2 wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, einschließlich einer erhöhten Anfallsanfälligkeit, was das Gen für mechanistische Studien zu Störungen inhibitorischer Schaltkreise relevant macht.
GABAA Rβ2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GABRB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GABRB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GABRB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GABRB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.