GABA_A Rβ1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403935-ACT

GABRB1 codifica la subunità β1 del recettore umano GABA\_A, un canale del cloruro attivato da ligando che media la rapida neurotrasmissione inibitoria nel sistema nervoso centrale. L’incorporazione delle subunità β è fondamentale per l’assemblaggio del recettore, la localizzazione sinaptica e le proprietà di gating del canale che modellano l’eccitabilità neuronale e le oscillazioni di rete. Attraverso la segnalazione GABAergica, GABRB1 contribuisce a processi quali l’inibizione sinaptica, la plasticità e l’equilibrio eccitazione–inibizione nei circuiti corticali e sottocorticali. Alterazioni nella composizione o nell’espressione delle subunità del recettore GABA\_A sono implicate in fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici, supportando l’uso di GABRB1 come nodo meccanicistico negli studi della disfunzione della segnalazione inibitoria.

GABAA Rβ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GABRB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GABAA Rβ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GABRB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GABRB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GABAA Rβ1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GABRB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GABAA Rβ1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GABAA Rβ1 nelle cellule tumorali con espressione di GABRB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.