GABA_A Rβ1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403935-ACT

GABRB1は、ヒトGABA_A受容体のβ1サブユニットをコードしています。GABA_A受容体はリガンド作動性の塩化物イオンチャネルであり、中枢神経系における迅速な抑制性神経伝達を担います。βサブユニットの組み込みは、受容体のアセンブリ、シナプス局在、ならびにニューロンの興奮性やネットワーク振動を規定するチャネルのゲーティング特性にとって重要です。GABA作動性シグナル伝達を介して、GABRB1は皮質および皮質下回路におけるシナプス抑制、可塑性、興奮—抑制バランスなどの過程に寄与します。GABA_A受容体のサブユニット構成や発現の変化は神経発達性および神経精神医学的表現型に関連するとされており、抑制性シグナル伝達の機能障害を研究する上で、GABRB1は機序解明の要となる分子として位置づけられます。

GABAA Rβ1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GABRB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GABAA Rβ1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GABRB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGABRB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GABAA Rβ1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGABRB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGABAA Rβ1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGABRB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGABAA Rβ1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。