GABA_A Rα3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403044-ACT

GABRA3 は、速い抑制性神経伝達を担うリガンド作動性塩化物チャネルの構成要素である、ヒトの γ-アミノ酪酸（GABA）A 型受容体 α3 サブユニット（GABAARα3）をコードします。五量体の GABAA 受容体に α3 サブユニットが組み込まれることで、チャネルのゲーティング特性や薬理学的性質、シナプス性／シナプス外の抑制トーンが規定され、神経細胞の興奮性やネットワークの振動（オシレーション）に影響します。GABAARα3 は GABA 作動性シナプス機能に関与するほか、活動依存的シグナル伝達を介して、神経突起の伸長や回路成熟といったより広範な神経発生過程にも関与します。GABRA3 の発現変化や抑制性シグナルの不均衡は、興奮―抑制バランスの破綻が病態形成に寄与する神経学的表現型や疾患関連状態と、研究上関連づけられています。

GABAA Rα3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GABRA3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GABAA Rα3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GABRA3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGABRA3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GABAA Rα3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGABRA3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGABAA Rα3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGABRA3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGABAA Rα3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。