GABARAPL2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403558-ACT

GABARAPL2（GABA type A receptor-associated protein-like 2）は、ATG8ファミリーに属するユビキチン様タンパク質で、脂質化を受けてオートファゴソーム膜に取り込まれ、カーゴ認識、小胞の伸長、オートファゴソーム成熟を支えます。LC3相互作用領域（LIR）を持つアダプターや膜輸送調節因子との相互作用を介して、マイトファジーやアグリファジーを含む選択的オートファジー・プログラムに寄与します。オートファジーをエンドメンブレン動態と結び付けることで、GABARAPL2は細胞のプロテオスタシスや、栄養感知・リソソーム更新などのストレス適応経路に影響します。オートファジーの破綻やATG8ネットワーク活性の異常は、神経変性、がん、感染、炎症性シグナル伝達に広く関与するとされており、GABARAPL2はこれらの文脈で機構解明研究を行ううえで有用な結節点となります。

GABARAPL2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GABARAPL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GABARAPL2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GABARAPL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGABARAPL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GABARAPL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGABARAPL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGABARAPL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGABARAPL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGABARAPL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。