G9a Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-430994-LAC

O gene **Ehmt2** de camundongo codifica a metiltransferase de lisina **G9a (EHMT2)**, um dos principais “escritores” das marcas **H3K9me1/2**, que promovem a formação de heterocromatina facultativa e a repressão gênica estável. A G9a coordena programas de silenciamento epigenético que moldam o comprometimento de linhagem, o desenvolvimento embrionário e a manutenção da identidade celular, por meio de interações com a metilação do DNA e com complexos de remodelamento da cromatina. Ao regular redes transcricionais ligadas ao controle do ciclo celular, às respostas a dano no DNA e ao estado metabólico, **Ehmt2** influencia diversas vias nucleares que governam a diferenciação e a adaptação ao estresse. A atividade desregulada de G9a e os padrões de metilação de H3K9 são frequentemente estudados em contextos de reprogramação transcricional oncogênica, alterações de expressão gênica associadas à fibrose e fenótipos do neurodesenvolvimento em sistemas modelo.

As Partículas de Ativação Lentivirais G9a (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ehmt2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais G9a (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ehmt2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de G9a. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ehmt2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.