G1P3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403682-ACT

ヒト IFI6（G1P3）は、自然免疫シグナル伝達および細胞ストレス応答を調節する、インターフェロン刺激性の膜結合タンパク質をコードしています。IFI6 は I 型インターフェロン／JAK–STAT シグナル伝達の下流で誘導され、ミトコンドリアの恒常性、アポトーシス感受性、ならびに転写ネットワークを再編する抗ウイルス制限プログラムの制御に関与することが示されています。IFI6 発現の変化は、炎症性の状況や複数のがんで報告されており、インターフェロン経路の活性化や、細胞の生存・増殖の変化と相関します。そのため、IFI6 は、インターフェロン駆動性経路、宿主—病原体相互作用、そしてヒト細胞におけるストレス適応表現型を解析する上で有用な結節点となります。

G1P3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFI6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

G1P3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFI6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFI6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性G1P3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFI6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるG1P3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFI6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるG1P3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。