FucT-l Plasmide Double Nickase (h): sc-410787-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FucT-l Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FucT-l Double Nickase Plasmid (h) e il FucT-l Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FUT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FucT-l Antibody (97-I): sc-52398
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FucT-l Plasmide Double Nickase (h) | sc-410787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FucT-l Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FUT1 codifica l’α1,2-fucosiltransferasi 1 (FucT-I), un enzima residente nel Golgi che trasferisce il fucosio al galattosio terminale per generare strutture di tipo H 1/2, precursori chiave degli antigeni dei gruppi sanguigni ABO e di epitopi glicani più ampi. Modellando la fucosilazione delle molecole di superficie cellulare e secrete, FucT-I influenza la maturazione di glicoproteine e glicolipidi, il riconoscimento mediato da lectine e processi legati all’adesione che si intrecciano con la biologia mucosale e le interazioni immunitarie. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di FUT1 possono rimodellare i pattern di glicosilazione, spesso studiati in contesti quali il legame ospite–microbo, l’infiammazione e i cambiamenti delle glicoforme associati ai tumori. Di conseguenza, FUT1 è comunemente oggetto di analisi in workflow di glicobiologia che collegano la glicosilazione nel Golgi alla segnalazione di membrana e alla comunicazione cellula–cellula.
FucT-l Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FUT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FUT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FUT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FUT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.