FRP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422897

Visão geral

Sfrp1 codifica a proteína 1 relacionada a frizzled secretada (FRP-1), um modulador secretado da sinalização Wnt que se liga a ligantes Wnt e a receptores Frizzled para moldar a amplitude da via e os gradientes espaciais. Ao ajustar a transcrição canônica dependente de β-catenina e as saídas não canônicas de Wnt, a FRP-1 influencia a proliferação, a diferenciação e a migração celular, bem como a remodelação da matriz extracelular durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. Em modelos murinos e estudos mecanísticos, alterações na atividade de Sfrp1 foram associadas a estados desregulados da via Wnt relevantes para fibrose, fenótipos metabólicos e esqueléticos e contextos de sinalização associados a tumores. Como Sfrp1 atua na interface extracelular, é frequentemente usado para dissecar o controle autócrino versus parácrino de programas guiados por Wnt.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FRP-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sfrp1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sfrp1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sfrp1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FRP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sfrp1 para a investigação da sinalização de FRP-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sfrp1 críticos para a função FRP-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sfrp1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FRP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo FRP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sfrp1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FRP-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR FRP-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sfrp1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sfrp1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.