FRMD6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435657-ACT

Frmd6 codifica a proteína murina FRMD6, um adaptador citoesquelético contendo domínio FERM que se associa à membrana plasmática e integra sinais que controlam a polaridade celular, a adesão e a regulação do crescimento dependente de contato. A FRMD6 tem sido relacionada à modulação da via Hippo, influenciando as saídas transcricionais de YAP/TAZ que coordenam programas de proliferação e diferenciação. Por meio dessas funções, a FRMD6 é relevante para estudos de organização epitelial, homeostase tecidual e mecanotransdução. Alterações na expressão de FRMD6 ou na sinalização Hippo a jusante têm sido associadas a fenótipos de crescimento desregulado e a aspectos da biologia do câncer, sustentando seu uso em genômica funcional com foco em vias de sinalização.

FRMD6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Frmd6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FRMD6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Frmd6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Frmd6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FRMD6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Frmd6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FRMD6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FRMD6 em células tumorais com expressão de Frmd6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.