FOXM1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416676-NIC

FOXM1はフォークヘッドボックス（forkhead box）ファミリーに属する転写因子であり、G1/S移行、DNA複製、ならびにG2/M期の有糸分裂開始に必要な遺伝子を制御することで、細胞周期の進行を統括する。CDK–RB/E2F経路や、PLK1およびAuroraキナーゼに関連する有糸分裂ネットワークなどのシグナルを統合し、増殖能とゲノム安定性の維持に寄与する。さらにFOXM1はDNA損傷応答や酸化ストレス関連プログラムも調節し、チェックポイント制御と複製ストレス耐性を結び付けている。FOXM1の発現や活性の破綻は、制御不能な増殖、染色体不安定性、腫瘍細胞生物学の変化としばしば関連するため、がん研究および細胞周期研究において広く解析されている重要な分子である。

FOXM1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FOXM1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FOXM1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FOXM1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FOXM1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。