FOXD3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402673-ACT

FOXD3（forkhead box D3）はフォークヘッドファミリーに属する転写因子で、初期胚のパターニング、神経堤の運命決定、および多能性に関連する転写状態の維持において中心的な役割を担います。系譜コミットメントを協調的に制御し、時期尚早な分化プログラムを抑制することで、FOXD3はクロマチンリモデリングや幹細胞シグナル伝達経路と交差する発生の遺伝子制御ネットワークに組み込まれています。FOXD3の発現異常は、細胞運命制御の変化、腫瘍細胞の可塑性、ストレス適応的な転写プログラムに関与するとされ、転移、治療抵抗性、発生異常の機序を研究する上で有用な結節点（ノード）となっています。ヒトのモデル系では、FOXD3活性はしばしば転写抑制／活性化のダイナミクス、エンハンサーの利用、系譜決定過程のエピジェネティック制御という文脈で解析されます。

FOXD3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXD3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXD3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXD3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXD3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXD3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXD3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXD3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXD3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXD3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。