Flt-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400684

概要

FLT4は受容体型チロシンキナーゼであるFlt-4（VEGFR-3）をコードしており、VEGFCおよびVEGFDの下流で作動するリンパ管新生シグナル伝達の主要なメディエーターです。リガンド依存的な活性化により自己リン酸化が誘導され、PI3K–AKT、MAPK/ERK、PLCγなどの関連経路が作動して、内皮細胞の生存、遊走、リンパ管のパターニングを制御します。Flt-4の活性は血管およびリンパ管の発生に寄与し、腫瘍関連リンパ管新生、転移性播種、炎症に伴うリモデリングの文脈でしばしば検討されます。さらに、FLT4シグナルの制御異常は遺伝性リンパ系疾患とも関連づけられており、血管生物学や疾患モデルにおける機序解明の要所（メカニスティック・ノード）としての有用性を裏づけています。

Flt-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFLT4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FLT4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FLT4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Flt-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Flt-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FLT4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Flt-4の機能に不可欠なFLT4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FLT4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Flt-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFlt-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FLT4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Flt-4 HDRプラスミド（h）および Flt-4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFLT4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFLT4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。