Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Flk-1/KDR/VEGFR2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400118-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Flk-1/KDR/VEGFR2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Flk-1/KDR/VEGFR2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Flk-1/KDR/VEGFR2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KDR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Flk-1/KDR/VEGFR2: sc-393163
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Flk-1/KDR/VEGFR2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Flk-1/KDR/VEGFR2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDR kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase Flk-1/KDR/VEGFR2, einen zentralen Signalrezeptor für VEGF-Liganden in vaskulären Endothelzellen. Die ligandeninduzierte Dimerisierung und Autophosphorylierung aktiviert PI3K–AKT-, RAS–RAF–MEK–ERK-, PLCγ–PKC- und SRC-Familien-Signalwege, um während Angiogenese und Vasculogenese die Proliferation, Migration, das Überleben von Endothelzellen sowie die Gefäßpermeabilität zu koordinieren. Die VEGFR2-Signalübertragung ist zudem mit der NO-Produktion und Programmen des Zytoskelett-Remodelings verknüpft, die Gefäßreifung und Sprossung steuern. Eine dysregulierte KDR-Aktivität und -Expression wird umfassend in der Tumorangiogenese, in ischämieassoziierten Neovaskularisationsreaktionen und beim entzündlichen vaskulären Remodeling untersucht.
Flk-1/KDR/VEGFR2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KDR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KDR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KDR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KDR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.