FKBP11 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405563-NIC

FKBP11は、小胞体（ER）に局在するFK506結合タンパク質ファミリーの一員をコードしており、ペプチジル‐プロリルcis–trans異性化酵素活性を介して、分泌経路におけるタンパク質のフォールディングと品質管理を支えます。抗体分泌細胞など分泌活性の高い細胞状態で高発現しており、ERのプロテオスタシス、新生ポリペプチドのフォールディング、ならびに小胞体ストレス応答（UPR）シグナルの制御に寄与します。これらの機能を通じて、FKBP11はERストレスへの細胞適応や、タンパク質成熟・輸送の調節と関連づけられています。FKBP11が関与するER恒常性の破綻は、分泌負荷とプロテオスタシス能力が変化する慢性炎症、免疫細胞分化、ストレス関連の病態生物学といった文脈で研究されています。

FKBP11 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FKBP11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FKBP11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FKBP11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FKBP11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。