FIG4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404404

概要

FIG4は、エンドリソソーム膜上に存在するホスファチジルイノシトール3,5-ビスリン酸（PI(3,5)P2）および関連脂質の代謝回転を制御するホスホイノシチド5-ホスファターゼをコードします。FIG4はPIKfyve–VAC14–FIG4からなる制御複合体に関与することで、エンドソームからリソソームへの輸送、オートファジー、膜リサイクル、ならびにリソソーム恒常性の維持に影響を及ぼします。FIG4活性の攪乱は、エンドリソソームのダイナミクスや細胞ストレス応答を破綻させ、これらは神経細胞の維持やミエリンの完全性にとって中核的な過程です。ヒト遺伝学研究によりFIG4機能不全が神経変性および神経発達の表現型と関連づけられており、神経系の生物学に関わる膜輸送経路における重要性が支持されています。

FIG4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFIG4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FIG4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FIG4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FIG4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FIG4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FIG4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FIG4の機能に不可欠なFIG4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FIG4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FIG4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFIG4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FIG4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FIG4 HDRプラスミド（h）および FIG4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFIG4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFIG4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。