FHOD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432529

概要

Fhod3は、直線状アクチンフィラメントの核形成および伸長を担うディアファナス関連フォルミンであるFHOD3をコードしており、アクチン細胞骨格のリモデリングと収縮性構造の組織化を支えています。マウスの横紋筋では、FHOD3はサルコメア構造に富化しており、Rho GTPaseにより制御されるアクチンダイナミクスを介して、筋原線維の組み立て、ストレスファイバー形成、ならびに細胞構築の維持に寄与します。これらの過程は、メカノトランスダクション、細胞形状、細胞内での力の伝達を制御する経路と交差しており、FHOD3は細胞骨格ホメオスタシスを研究するうえで有用なノードとなります。アクチン構造の破綻やサルコメアの完全性低下は、心筋症や筋機能障害の表現型と関連しているため、Fhod3はin vitroで構造的な心疾患・筋疾患の機序をモデル化する際の関連性の高い標的として位置づけられます。

FHOD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFhod3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fhod3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fhod3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FHOD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FHOD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fhod3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FHOD3の機能に不可欠なFhod3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fhod3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FHOD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFHOD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fhod3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FHOD3 HDRプラスミド（m）および FHOD3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFhod3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFhod3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。