FHOD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404286-ACT

FHOD1 (formin homology 2 domain containing 1) codifica uma formina relacionada à família Diaphanous que catalisa a montagem linear de filamentos de actina e coordena a comunicação cruzada entre actina e microtúbulos para controlar a forma celular, a adesão e a migração direcional. A atividade de FHOD1 influencia vias de remodelamento do citoesqueleto ligadas às GTPases Rho e contribui para a formação de fibras de estresse e de estruturas contráteis de actomiosina. Por seu papel na dinâmica do citoesqueleto, FHOD1 tem sido associada a processos relevantes para o remodelamento tecidual, o comportamento celular invasivo e a motilidade desregulada observada em múltiplos contextos de doença, incluindo a biologia do câncer. Modular a expressão de FHOD1 é, portanto, útil para dissecar mecanismos de mecanotransdução, polarização celular e fenótipos dependentes de migração em sistemas modelo humanos.

FHOD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FHOD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FHOD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FHOD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FHOD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FHOD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FHOD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FHOD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FHOD1 em células tumorais com expressão de FHOD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.