Fgl2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420346

概要

Fgl2（フィブリノーゲン様タンパク質2）は、内皮細胞および骨髄系細胞に発現する、膜結合型かつ分泌型の免疫調節タンパク質であり、止血および炎症シグナル伝達に関与します。マウスでは、Fgl2は凝固を自然免疫・獲得免疫応答と結び付けるプロトロンビナーゼ活性に寄与し、炎症組織内におけるサイトカインネットワークや白血球のリクルートメントに影響を及ぼします。その発現は炎症性刺激の下流で調節され、ウイルス性肝炎モデル、移植拒絶、腫瘍関連の免疫抑制といった文脈で研究されてきました。これらの機能により、Fgl2は凝固経路、マクロファージ／T細胞の制御、ならびに組織傷害応答の間のクロストークを解明するための重要な標的となります。

Fgl2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFgl2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fgl2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fgl2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Fgl2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Fgl2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fgl2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Fgl2の機能に不可欠なFgl2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fgl2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Fgl2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFgl2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fgl2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Fgl2 HDRプラスミド（m）および Fgl2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFgl2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFgl2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。