FDX1L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426948

概要

Fdx1lは、ミトコンドリアのフェレドキシンファミリータンパク質であるフェレドキシン1様（FDX1L）をコードしており、ミトコンドリアのレドックスバランスや酸化代謝を支える電子伝達反応に関与するとされています。FDX1Lは電子をミトコンドリア酵素へ受け渡すことで、鉄-硫黄クラスターの維持、ステロイド生成やヘム関連反応、さらに広範なミトコンドリア恒常性に関連する経路に影響を及ぼし得る位置づけにあります。ミトコンドリアのフェレドキシン依存的プロセスが乱れると、活性酸素種（ROS）の処理、代謝の柔軟性、ストレス応答が変化し得るため、Fdx1lはミトコンドリア機能障害の研究において重要な対象となります。マウス系では、Fdx1lは、ミトコンドリア電子伝達が細胞代謝やミトコンドリア機能低下に起因する疾患関連表現型とどのように接続しているかを検討するうえで、扱いやすい研究ノードとなります。

FDX1L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFdx1l遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fdx1l内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fdx1lのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FDX1Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FDX1Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fdx1l欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FDX1Lの機能に不可欠なFdx1lエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fdx1lゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FDX1L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFDX1L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fdx1l遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FDX1L HDRプラスミド（m）および FDX1L HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFdx1lホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFdx1l標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。