Fc ε RIγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420303

概要

Fcer1gはFc受容体γ鎖（FcεRIγ）をコードしており、ITAMモチーフを含むシグナル伝達アダプターとして、FcεRIやFcγ受容体複合体など複数の免疫受容体と会合し、リガンド結合を下流の活性化へと結び付けます。受容体が架橋されると、FcεRIγはSYK依存性のシグナルカスケードを駆動し、PI3K、PLCγ、MAPK、カルシウムフラックス、脱顆粒、サイトカイン産生、ならびに骨髄系細胞や組織常在性免疫細胞集団における貪食プログラムと交差します。マウスではFcer1gが、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、ミクログリアにおける自然免疫の感知とエフェクター応答を支え、炎症トーンや免疫複合体の処理に影響を与えます。FcεRIγに連結した経路の破綻は、アレルギー性炎症、自己免疫における免疫複合体病態、ならびにFc受容体シグナルが組織障害やリモデリングに影響する神経炎症過程において広く研究されています。

Fc ε RIγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFcer1g遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fcer1g内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fcer1gのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Fc ε RIγタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Fc ε RIγシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fcer1g欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Fc ε RIγの機能に不可欠なFcer1gエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fcer1gゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Fc ε RIγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFc ε RIγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fcer1g遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Fc ε RIγ HDRプラスミド（m）および Fc ε RIγ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFcer1gホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFcer1g標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。