FBXO29 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433093

Visão geral

Fbxw8 codifica a proteína de caixa F FBXO29, um componente de reconhecimento de substratos dos complexos de ligase E3 de ubiquitina do tipo SKP1–CUL1–F-box (SCF), que direciona proteínas específicas para ubiquitinação e degradação pelo proteassoma. Por meio da degradação regulada de componentes de sinalização e reguladores do ciclo celular, a FBXO29 contribui para o controle da homeostase proteica, da proliferação e de programas de diferenciação. Como parte do controle de qualidade dependente de ubiquitina, as ligases do tipo SCF se conectam a vias que modulam a sinalização por fatores de crescimento e as respostas ao estresse, tornando as alterações em Fbxw8 relevantes para o estudo de mecanismos de proteostase desregulada observados no câncer e em outros distúrbios proliferativos ou do desenvolvimento. Modelos murinos de Fbxw8 são, portanto, úteis para definir redes de substratos de ligases de ubiquitina e seu impacto em fenótipos celulares.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FBXO29 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Fbxw8 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Fbxw8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Fbxw8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FBXO29.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Fbxw8 para a investigação da sinalização de FBXO29, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Fbxw8 críticos para a função FBXO29
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Fbxw8 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FBXO29 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo FBXO29 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Fbxw8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FBXO29 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR FBXO29 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Fbxw8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Fbxw8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.