FBL10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403232

概要

KDM2Bは、ヒトタンパク質FBL10をコードしている。FBL10はJmjCドメインを有するヒストンリジン脱メチル化酵素で、CxxC亜鉛フィンガーを介してCpGリッチなDNAを認識し、クロマチンのアクセス性を調節する。FBL10はPolycomb複合体に関連した転写抑制に関与し、細胞周期の進行、系譜決定、細胞同一性の維持を制御するエピジェネティック・プログラムの協調に寄与する。ヒストンのメチル化状態やプロモーター／エンハンサー活性の制御を通じて、KDM2Bは増殖と分化を司る経路に影響を及ぼす。KDM2B活性の異常やクロマチン標的化の変化は、さまざまながんおよび造血系の文脈において、腫瘍性の転写状態や異常な幹細胞様表現型と関連づけられており、エピジェネティック制御の機構解析に有用な遺伝子座である。

FBL10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKDM2B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KDM2B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KDM2Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FBL10タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FBL10シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KDM2B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FBL10の機能に不可欠なKDM2Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KDM2Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FBL10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFBL10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KDM2B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FBL10 HDRプラスミド（h）および FBL10 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKDM2Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKDM2B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。