FAST CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406169

概要

FASTK（Fas活性化セリン／スレオニンキナーゼ）は、ミトコンドリアに局在するRNA結合タンパク質をコードしており、酸化的リン酸化に必要な特定のミトコンドリアRNA（mtRNA）のプロセシングや安定性を含む、ミトコンドリア遺伝子発現の転写後制御に関与しています。ミトコンドリア恒常性における役割を通じて、FASTKは細胞のバイオエネルギー、ストレス適応、ならびにFas媒介性経路に関連するアポトーシスシグナル伝達に影響を及ぼします。FASTKに関連したミトコンドリアRNA代謝やOXPHOS（酸化的リン酸化）能の破綻は、代謝ストレス、神経変性、がん細胞の生存表現型といった、ミトコンドリア機能が重要な決定因子となる文脈で検討されています。

FAST CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFASTK遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FASTK内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FASTKのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FASTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FASTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FASTK欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FASTの機能に不可欠なFASTKエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FASTKゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FAST CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFAST CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FASTK遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FAST HDRプラスミド（h）および FAST HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFASTKホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFASTK標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。