FAS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420287

概要

Fasは、TNF受容体スーパーファミリーに属するデスレセプターであるFAS（CD95／APO-1）をコードしており、FASリガンドとの結合と、それに続くデス誘導シグナル複合体（DISC）の形成によって外因性アポトーシスを開始します。このシグナル伝達カスケードではFADDがリクルートされ、CASP8／CASP10が活性化されることで下流の実行カスパーゼへとつながり、細胞の状況に応じてミトコンドリア経路のアポトーシスやNF-κB関連の生存プログラムとも交差します。マウスの免疫恒常性においては、FASを介した活性化誘導性細胞死がリンパ球の過剰な増殖を抑え、末梢免疫寛容の維持に寄与します。Fas／FASシグナルの異常は、アポトーシス不全、慢性的な免疫活性化、リンパ増殖、ならびに炎症モデルにおける組織障害応答の変化と関連しています。

FAS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFas遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fas内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fasのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FASタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FASシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fas欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FASの機能に不可欠なFasエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fasゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FAS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFAS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fas遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FAS HDRプラスミド（m）および FAS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFasホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFas標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。