FAM46C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407319-ACT

FAM46C（別名TENT5C）は、非カノニカルなポリ（A）ポリメラーゼをコードしており、転写後段階におけるmRNAの安定性とタンパク質産生量の制御に関与する。とりわけ、分泌および分化プログラムにおいて重要な役割を担う。免疫細胞や形質細胞の文脈では、FAM46Cは免疫グロブリン産生の調節や、小胞体におけるプロテオスタシス（タンパク質恒常性）のより広範な制御と関連付けられており、RNA代謝、アンフォールド・プロテイン・レスポンス（UPR）、分泌経路の恒常性を司る経路の一部として位置づけられる。FAM46C活性の変化は血液疾患の生物学、とりわけ多発性骨髄腫で頻繁に研究されており、その機能変動が形質細胞の適応度やストレスシグナル伝達の破綻と関連することが示されている。これらの特性により、FAM46Cはヒトモデル系において、RNAテイリング依存的な遺伝子発現制御や分泌細胞状態の遷移を解析するための有用な標的となる。

FAM46C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM46Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAM46C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAM46C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM46C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAM46Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM46C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAM46C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM46C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAM46C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。