FAM20B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411386-ACT

FAM20B codifica uma xilosilquinase de glicosaminoglicanos (GAG) residente no complexo de Golgi, que fosforila o resíduo de xilose na região do ligador tetrassacarídico necessária para a biossíntese de proteoglicanos. Ao regular a iniciação e o alongamento das cadeias de heparan sulfato e de condroitina/dermatan sulfato, a FAM20B influencia a organização da matriz extracelular, a adesão célula–matriz e a distribuição de fatores de crescimento, incluindo eixos de sinalização como FGF, WNT e BMP. Alterações na homeostase de proteoglicanos/GAG estão associadas a defeitos no desenvolvimento esquelético, na integridade do tecido conjuntivo e a programas de sinalização celular desregulados relevantes para a remodelação do microambiente tumoral. Como resultado, a FAM20B é estudada em vias que controlam proliferação, migração e morfogênese do desenvolvimento dependentes da matriz.

FAM20B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAM20B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAM20B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAM20B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAM20B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAM20B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAM20B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAM20B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAM20B em células tumorais com expressão de FAM20B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.