Plasmide Double Nickase (h) Factor VIII: sc-400373-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Factor VIII correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Factor VIII Double Nickase (h) et le plasmide Factor VIII Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant F8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Factor VIII light chain Antibody (RFFVIII C/5): sc-59512
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Factor VIII | sc-400373-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Factor VIII | sc-400373-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **F8** code le facteur VIII de la coagulation, un cofacteur glycoprotéique qui circule lié au facteur von Willebrand et qui est activé par la thrombine au cours de la voie intrinsèque. Le facteur VIII activé (FVIIIa) forme, avec le facteur IXa, le complexe ténase intrinsèque à la surface de phospholipides, accélérant l’activation du facteur X et la génération de thrombine en aval dans la cascade de coagulation. Les variants à perte de fonction de **F8** réduisent l’efficacité de la voie intrinsèque et sont fortement associés à l’hémophilie A, offrant un point d’entrée moléculaire pour étudier l’hémostase, la biosynthèse endothélio-hépatique des protéines et la régulation des cofacteurs de protéases. La perturbation expérimentale de **F8** permet une analyse mécanistique de la dynamique du réseau de coagulation, du traitement et de la sécrétion de FVIII, ainsi que des interactions avec le vWF dans des modèles cellulaires humains.
Factor VIII Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus F8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de F8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de F8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de F8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.