EYA2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403115-ACT

EYA2は、転写共役活性化因子であり、haloacid dehalogenase（HAD）ファミリーに属するタンパク質チロシンホスファターゼでもあるEyes absent homolog 2をコードしており、発生および組織恒常性の維持における遺伝子発現プログラムを調節する。EYA2はSIX/DACHの制御ネットワークと統合され、リン酸化依存的なシグナル伝達と転写制御を介して、細胞運命の決定、分化、DNA損傷応答などの過程に寄与する。EYA2の発現や活性の破綻は、複数の疾患状況において増殖・遊走・上皮間葉転換（EMT）プログラムの変化と関連づけられており、腫瘍学および発生生物学の研究における重要性を支持している。ヒトの核—細胞質シャトル型レギュレーターとして、EYA2はストレスシグナル伝達や系譜特異的な転写回路における役割の観点から、しばしば研究対象となっている。

EYA2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EYA2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EYA2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EYA2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEYA2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EYA2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEYA2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEYA2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEYA2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEYA2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。